Perfil sérico proteico de vacas Holandesas no período de transição / Serum protein profile of Holstein cows during the transition period

O objetivo deste trabalho foi avaliar, de forma longitudinal, o perfil sérico proteico de 13 vacas Holandesas durante o período de transição. Amostras de sangue (n=78) foram coletadas semanalmente, da segunda semana pré-parto (M-2) até a terceira semana pós-parto (M3), para determinação do perfil sérico proteico, por meio de teste bioquímico (proteínas séricas totais - PT) e eletroforese em gel de poliacrilamida SDS-PAGE, para as outras proteínas analisadas. Os valores de PT diminuíram de forma gradativa (P=0,000) de M-2 (6,4g/dL) a M0 (6,2g/dL), aumentando nos momentos subsequentes (M3=7,3g/dL). As concentrações da IgG de cadeia pesada (M-2=919,4; M-1=1074,5mg/dL) e de cadeia leve (M-2=393,9; M-1=466,7mg/dL) foram menores no pré-parto em relação ao pós-parto (M1=1283,3; M2=1374,2 e M3=1630,3 mg/dL para IgG pesada e M1=463,4; M2=573,7; M3=651,8mg/dL para IgG leve). Para a IgA, houve diminuição nos valores (P=0,001), de M-2 (51,9mg/dL) a M1 (34,0mg/dL), e aumento em M2 (45,4g/dL) e M3 (62,6g/dL). Os valores de haptoglobina (Hp) e ceruloplasmina (Cp) aumentaram (P=0,000) de M-2 (Hp=16,6mg/dL; Cp=8,6mg/dL) a M3 (Hp=60,9mg/dL; Cp=127,1mg/dL). A albumina apresentou ligeiras variações durante o período de transição (P=0,000), enquanto a transferrina sérica (P=0,101) e a glicoproteína ácida (P=0,105) foram estáveis. O escore de condição corporal (ECC) também foi analisado durante o período de transição, verificando-se diferença (P=0,003) entre M-2 (ECC=4,0) e M1 (ECC=3,0). Foi relatada ainda a ocorrência de distocias (4/13), retenção de placenta (1/13) e hipocalcemia (1/13) no dia da parição (M0) e infecções uterinas (5/13) e cetose (1/13) ocorridas no pós-parto. Concluiu-se, portanto, que houve aumento nas concentrações séricas de Hp e Cp e diminuição nos valores de imunoglobulina e transferrina em vacas Holandesas no período de transição, relacionados às doenças ocorridas nesse período e ao elevado ECC, promovendo modificações metabólicas e imunossupressão.(AU)

The aim of this study was to evaluate longitudinally the serum protein profile of 13 Holstein cows during the transition period. Blood samples (n=78) were taken weekly, from the second week before parturition (M-2) to the third week after parturition (M3) for determination of serum protein profile by biochemical tests (total serum protein - PT) and SDS-PAGE electrophoresis, for the other proteins analyzed. PT values decreased gradually (P = 0.000) from M-2 (6.4g/dL) to M0 (6.2g/dL), increasing in subsequent moments (M3 = 7.3g/dL). The concentrations of the heavy chain (M-2=919.4; M-1=1074.5mg/dL) and the light chain of IgG (M-2=393.9; M-1=466.7mg/dL) were lower in pre-calving compared to post calving (M1= 1,283.3; M2=1,374.2 and M3=1,630.3 mg/dL for the heavy chain, and M1=463.4; M2=573.7 and M3=651,8 mg/dL for the light chain of IgG). For IgA there was a decrease in the values (P=0.001), from M-2 (51.9mg/dL) to M1 (34.0mg/dL), and increase in M2 (45,4g/dL) and M3 (62,6g/dL). The values of haptoglobin (Hp) and ceruloplasmin (Cp) increased (P=0,000) from M-2 (Hp=16.6mg/dL; Cp=8.6 mg/dL) to M3 (Hp=60.9mg/dL; Cp=127.1mg/dl). Albumin showed slight variations during the transition period (P=0.000), while the serum transferrin (P=0.101) and acid glycoprotein (P=0.105) were stable. Body condition score (BCS) was also analyzed during the transition period, checking the difference (P=0.003) between M-2 (ECC= 4.0) and M1 (ECC=3.0). It was also reported the occurrence of dystocia (4/13), retained placenta (1/13) and hypocalcemia (1/13) on the day of calving (M0) and uterine infections (5/13) and ketosis (1/13) occurring in the post calving. In conclusion, there was an increase in serum Hp and Cp, and a decrease in the immunoglobulins and transferrin amounts in Holstein cows during the transition period, related to diseases occurring during this period and the high BCS, promoting metabolic changes and immunosuppression.(AU)

Infección experimental de aislados humanos de Blastocystis sp. en ratones inmunosuprimidos con dexamentasona / Experimental infection using human isolates of Blastocystis sp. in dexamethasone immunosurpressed mice

Blastocystis sp. es un protozoario controversial en cuanto a su papel patogénico, asociado a enfermedad gastrointestinal, con alta prevalencia. A fin de evaluar signos, síntomas y hallazgos de laboratorio producidos por Blastocystis sp., ratones inmunosuprimidos con dexametasona fueron infectados con morfologías del parásito obtenidos de pacientes sintomáticos y asintomáticos. Los parásitos se aislaron empleando gradiente de densidad con lymphoprep™, se realizó semicuantificación de las morfologías presentes en las muestra de heces, y se inocularon 1,6 × 105 parásitos en ratones Balb/c, vía intragástrica. En heces de pacientes sintomáticos se encontraron seis veces más vacuolares que granulares, mientras que en asintomáticos la relación fue apenas dos veces mayor. Los síntomas más frecuentes en los pacientes fueron: flatulencia (85%), dolor de cabeza(62%), dolor abdominal (55%), fiebre (30%) y estreñimiento (8%). La semicuantificación de parásitos por campo en humanos no encontró relación directa entre carga parasitaria y sintomatología gastrointestinal, mientras que en la cuantificación de parásitos por gramo de heces si existió. Los ratones presentaron signos variables luego de la infección, todos aquellos infectados con muestras de pacientes sintomáticos presentaron signos, mientras que solo algunos de los infectados con muestras de pacientes asintomáticos los desarrollaron. Se demostró que no existe relación estadísticamente significativa (p= 0,8) entre la morfología del parásito y los signos manifestados por el ratón; sin embargo hubo una relación estadísticamente significativa (p=0,02) entre las formas vacuolares del parásito y la aparición de síntomas en los pacientes. Se concluye que Blastocystis sp. tiene capacidad de producir signos sugestivos de patología en ratones.

Blastocystis sp. is a controversial protozoan in terms of its pathogenic role associated with high-prevalence gastrointestinal disease. To evaluate signs, symptoms and laboratory findings produced by Blastocystis sp., dexamethasone immunosuppressed mice were infected with parasite morphologies obtained from symptomatic and asymptomatic patients. The parasites were isolated using density gradient with lymphoprep™, semi-quantification of the morphologies present in the stool sample was performed and 1.6 × 105 parasites were inoculated into Balb/c mice, intragastrically. In the faeces of symptomatic patients, vacuolar morphology was six times greater than granular morphology, whereas the ratio in asymptomatic patients was only two times greater. The most common symptoms in patients were flatulence (85%), headache (62%), abdominal pain (55%), fever (30%) and constipation (8%). The semi-quantification of parasites per field in humans evidenced no direct relationship between parasite burden and gastrointestinal symptoms, while in parasite quantification per gram of feces, a direct relationship was found. The mice showed variable signs after infection; all those infected with samples from symptomatic patients showed signs, while only some of those infected with samples from asymptomatic patients developed them. It was demonstrated that no statistically significant (p = 0.8) relationship exists between the morphology of the parasite and the signs manifested by the mouse; nevertheless, there was a statistically significant (p = 0.02) relationship between the vacuolar forms of the parasite and onset of symptoms in patients. Conclusions are that Blastocystis sp. is capable of producing signs suggestive of pathology in mice.

Imunoproteção de ilhotas pancreáticas microencapsuladas em biomateriais inovadores e seu potencial terapêutico no diabetes mellitus tipo 1 / Immunoprotection of pancreatic islets microencapsulated in inovative biomaterials and its therapeutic potential in type 1 Diabetes Mellitus

O transplante de ilhotas microencapsuladas constitui uma alternativa terapêutica interessante para o Diabetes Mellitus tipo 1, permitindo um melhor controle glicêmico e eliminando a necessidade de imunossupressão. Entretanto, a manutenção a longo prazo da viabilidade das células-β ainda é um desafio. No isolamento, a perda da matriz extracelular e as condições hipóxicas subsequentes afetam decisivamente a sobrevivência e funcionalidade das ilhotas. Objetivo Para diminuir o estresse sobre o enxerto, levando a um sucesso prolongado do transplante, propôs-se a adição de perfluorocarbono (PFC) ou laminina (LN), moléculas associadas respectivamente à oxigenação e interações célula-célula, ao biomaterial baseado em alginato, Biodritina, adequado ao encapsulamento celular. Metodologia Para testar a estabilidade das formulações PFC-Biodritina e LN-Biodritina, microcápsulas foram submetidas a diferentes estresses (rotacional, osmótico, temperatura e cultura) por 7 e 30 dias. A pureza do biomaterial foi avaliada pela coincubação com macrófagos murinos RAW264.7, por 3, 9 e 24h, quando a ativação dos macrófagos foi observada pela expressão gênica de IL- 1β e TNFα. Microcápsulas implantadas i.p. em camundongos foram recuperadas após 7 ou 30 dias, para análises de biocompatibilidade. A expressão de níveis de mRNA (bax, bad, bcl-2, bcl-XL, xiap, caspase 3, mcp1/ccl2, hsp70, ldh, insulina 1 e 2), proteínas (Bax, Bcl-XL e Xiap) e a atividade de Caspase3 foram avaliadas em ilhotas microencapsuladas com PFC- e LN-Biodritina, após cultura de 48h em condições de normóxia e hipóxia (<2% O2). Camundongos diabéticos foram transplantados com ilhotas encapsuladas nas diferentes formulações e os animais foram monitorados pelas variações de massa corporal, glicêmicas e pela funcionalidade do enxerto (TOTGs). As ilhotas foram recuperadas de animais normo ou hiperglicêmicos e uma análise de biocompatibilidade das cápsulas foi realizada, assim como a avaliação funcional das células-β...

Transplantation of microencapsulated islets represents an attractive therapeutical approach to treat type 1 Diabetes Mellitus, accounting for an improved glycemic control and the abolishment of immunosuppressive therapies. However, maintenance of long-term β-cell viability remains a major problem. During islet isolation, the loss of extracellular matrix interactions and the hypoxic conditions thereafter dramatically affect β-cell survival and function. Objective To lessen the burden of islet stress and achieve a better outcome in islet transplantation we tested the addition of perfluorocarbon (PFC) or laminin (LN), molecules associated respectively with oxygenation and cell-cell interaction, to Biodritin, an alginate-based material suitable for cell microencapsulation. Methodology To test the stability of PFC-Biodritin and LN-Biodritin composites, microcapsules were subjected to different stresses (rotational, osmotic, temperature and culture) for 7 and 30 days. To assess biomaterial purity microcapsules were co-incubated with RAW264.7 murine macrophage cell line for 3, 9 and 24h and macrophage activation was detected through mRNA levels of IL-1β and TNFα. Microcapsules were implanted i.p. in mice and retrieved after 7 or 30 days, for biocompatibility analyses. Gene expression at mRNA (bax, bad, bcl-2, bcl-XL, xiap, caspase 3, mcp1/ccl2, hsp70, ldh, insulin 1 and 2) and protein (Bax, Bcl-XL and Xiap) levels, together with Caspase3 activity, were evaluated in islets microencapsulated in PFC- or LN-Biodritin, upon culturing for 48h in normoxic or hypoxic (<2% O2) conditions. Diabetic mice were transplanted with PFC- or LN-Biodritin microencapsulated islets, followed by assessments of body weight, glycemia and graft function by oral glucose tolerance tests (OGTTs). Microencapsulated islets were retrieved from normoglycemic or hyperglycemic mice and biocompatibility analyses of the beads together with a functional assessment of the graft followed. After graft...

Eficácia, tolerabilidade e segurança do uso do sirolimo após o transplante renal / Sirolimus efficacy, tolerability, and safety for treatment after kidney transplantation

Introdução: Sirolino (SRL) é um imunossupressor com conhecida eficácia e perfil de segurança na profilaxia da rejeição aguda após o transplante renal. Objetivos:Avaliar eficácia, tolerabilidade e segurança do uso do SRL e de prednisona em associação a ciclosporina (CSA) ou tarcolino (TAC) após o transplante renal. Metodologia: Estudo retrospectivo de 332 receptores de transplantes renais realizados entre 1999 e 2006. O desfecho primário foi a falha de tratamento, definida como a incidência cumulativa de rejeição aguda confirmada por biópsia (RACB), perda do enxerto, óbito ou descontinuação do SRL. Resultados: Dos 332 transplantes, 92% foram com doador vivo. A média de idade dos receptores foi de 37 anos, sendo 65% homens, 46% brancos e 6% diabéticos. SRL foi associado a CSA ou TAC em 70,8% e 29,2% dos pacientes. A incidência de falha de tratamento foi de 22,2% e de 47,8% no final do primeiro e do quinto ano de transplante, sem diferença entre pacientes recebendo CSA ou TAC. Ao final do quinto ano, as sobrevidas do paciente, do enxerto, do enxerto censorando o óbito e livre de RACB foram de 92,8%, 86,1%, 92,7% e 82,2%, respectivamente. O tratamento com SRL foi interrompido em 27,1% dos pacientes: 22,9% em razão de reações adversas e 3,3% devido à ineficácia. os principais motivos de suspensão do SRL foram dislipidemia (6,0%), disfunção do enxerto (5,2%), proteinúria (4,5%), infecções (1,5%), dificuldade de cicatrização (1,2%) e anemia (0,9%). Conclusão: Na população estudada, a eficácia e a segurança do SRL foram semelhantes quando combinado com CSA ou TAC. A tolerabilidade oral foi adequada considerando-se a relativa baixa taxa de interrupção do uso de SRL.

Introduction: Sirolino (SRL) is an immunosuppressive agent with known efficacy and safety profile for prophylaxis of acute rejection after renal transplantation. Objectives: To evaluate efficacy, tolerability and safety of the SRL and prednisone in combination with cyclosporine (CSA) or tarcolino (TAC) after renal transplantation. Methodology: A retrospective study of 332 recipients of kidney transplants performed between 1999 and 2006. The primary outcome was treatment failure, defined as the cumulative incidence of acute rejection confirmed by biopsy (RACB), graft loss, death or discontinuation of SRL. Results: Of 332 transplants, 92% were with living donors. The mean age of recipients was 37 years, 65% men, 46% white and 6% were diabetic. SRL was combined with CSA or TAC in 70.8% and 29.2% of patients. The incidence of treatment failure was 22.2% and 47.8% at the end of the first and fifth year of transplantation, with no difference between patients receiving CSA or TAC. At the end of the fifth year, the survival of the patient, graft, death censored graft and free of RACB were 92.8%, 86.1%, 92.7% and 82.2% respectively. Treatment with SRL was discontinued in 27.1% of patients: 22.9% because of adverse reactions and 3.3% due to inefficiency. The main reasons for discontinuation of SRL were dyslipidemia (6.0%), graft dysfunction (5.2%), proteinuria (4.5%), infections (1.5%), poor wound healing (1.2% ) and anemia (0.9%). Conclusion: In this population, the efficacy and safety of SRL were similar when combined with CSA or TAC. The oral tolerance was adequate considering the relatively low rate of discontinuation of SRL.

Regeneração hepática em organismos em crescimento e efeitos de drogas imunossupressoras / Liver regeneration in growing bodies and effects of immunosuppressive drugs / Hígado de regeneración en sus cuerpos en crecimiento y los efectos de los fármacos inmunosupresores

Transplante parciais de fígado em crianças têm sido realizados com maior frequência, enfatizando a importância do estudo da regeneração hepática, bem como dos efeitos de drogas imunossupressoras sobre a mesma. A regeneração do parêquima é o resultado do balanço entre multiplicação celular e apoptose, esta última definida como morte celular programa. Neste processo, estão envolvidas expressões de genes pró-apoptóticos (Bak e Bax) e anti-apoptóticos (Bcl-XL e Bcl-2). Dentre as proteínas relacionadas à proliferação de hepatócitos, destaca-se a interelucina-6 (IL-6). Embora o modelo de ressecção de 70% da massa hepática de ratos adultos seja amplamente utilizado para estudos de regeneração, não há trabalhos com animais em crescimento. Após a padronização dos modelos de hepatectomia parcial e regeneração hepática em animais recém-nascidos e recém-desmamados, o estudo sobre o efeito das drogas imunossupressoras mostrou resultados diferentes daqueles descritos em animais adultos, não havendo alteração no número de células em proliferação ou apoptose embora provocassem alterações na expressão do gene anti-apoptótico Bcl-2.

Partial liver transplantation in children have been performed more frequently, emphasizing the importance of the study of liver regeneration, as well as the effects of immunosuppressive drugs on it. The regeneration of parenchymal is the result of the balance between proliferation and apoptosis, the latter defined as cell death process programa. There are involved expressions of pro-apoptotic genes (Bax and Bak) and anti-apoptotic (Bcl-XL and Bcl- 2). Among the proteins related to proliferation of hepatocytes, we highlight the interelucina-6 (IL-6). Although the model of resection of 70% of liver mass of adult rats are widely used for studies of regeneration, there are no studies with growing animals. After the standardization of models of partial hepatectomy and liver regeneration in newborn animals and newly weaned, the study on the effect of immunosuppressive drugs showed different results from those described in adult animals, with no change in the number of cells in proliferation or apoptosis although provoke changes in gene expression of antiapoptotic Bcl-2.

Trasplante hepático parcial en los niños se han realizado con mayor frecuencia, haciendo hincapié en la importancia del estudio de la regeneración hepática, así como los efectos de los medicamentos inmunosupresores en él. La regeneración de parénquima es el resultado del balance entre la proliferación y la apoptosis, esta última definida como programa. Neste proceso de muerte celular están implicados expresiones de genes pro-apoptóticos (Bax y Bak) y anti-apoptóticas (Bcl-XL y Bcl- 2). Entre las proteínas relacionadas con la proliferación de los hepatocitos, destacamos la interelucina-6 (IL-6). Aunque el modelo de la resección del 70% de la masa del hígado de ratas adultas son ampliamente utilizados para estudios de regeneración, no hay estudios con animales en crecimiento. Después de la normalización de los modelos de hepatectomía parcial y la regeneración del hígado en animales recién nacidos y destetados recientemente, el estudio sobre el efecto de los fármacos inmunosupresores mostraron resultados diferentes de los descritos en animales adultos, sin cambio en el número de células en proliferación o apoptosis, aunque provocar cambios en la expresión génica de antiapoptóticas Bcl-2.

Función inmunosupresora de las glicoproteínas de VIH-1, agente causal del SIDA / HIV-1 glycoprotein immunosuppression function

En este trabajo se demuestra que el virus VIH-1 inactivado por la luz ultravioleta inhibe la proliferación de linfocitos humanos estimulados con mitógenos; estos datos concuerdan con reportes de otros grupos. Además se observó que no es necesaria la presencia del virus completo ya que membranas celulares aisladas de células infectadas también tienen efecto supresor. Existen indicios de que la glicoproteína de transmembrana (gp41) de VIH-1 induce un efecto supresor, pero los experimentos aquí descritos usando gp41 purificada no pudieron confirmar esas observaciones. El efecto supresor de VIH-1 pudo ser bloqueado con anticuerpos monoclonales anti-CD4 (epitopio OKT4a) lo que implica que la interacción entre el receptor de los linfocitos T con la glicoproteína de superficie (gp120) juega un papel importante. Esto sugiere y confirma resultados de otros grupos que la gp120 tiene efecto inmunosupresor. Los sueros de pacientes positivos no mostraron efecto neutralizante sobre el virus aun cuando el suero contiene anticuerpos contra todas las proteínas estructurales del virus